酶標(biāo)儀原理

　　酶標(biāo)儀：即酶聯(lián)免疫檢測儀（ELISA Reader）是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器?？珊唵蔚胤譃榘胱詣?dòng)和全自動(dòng)2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計(jì)，即用比色法來分析抗原或抗體的含量。ELISA測定一般要求測試液的最終體積在250ul以下，用一般光電比色計(jì)無法完成測試，因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法

　　酶標(biāo)朕免疫吸附試驗(yàn)方法簡稱酶標(biāo)法，是標(biāo)記技術(shù)中的一種，是從熒光抗體技術(shù)，同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技術(shù)。

　　酶標(biāo)法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)抗原或抗體，此酶標(biāo)抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng)，并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復(fù)合物。當(dāng)加入相應(yīng)底物時(shí)，底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色。顏色深淺與相應(yīng)抗原或抗體含量成正比。

　　由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應(yīng)和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是一種極富生命力的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。

　　酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)

　　酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。

　　光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號。電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。

　　微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測，因此省去了X，Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單。

　　微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。其常見規(guī)格有40孔板，55孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對其可進(jìn)行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測。

　　酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計(jì)相同的單色器來得到。在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，其效果是相同的。光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡，光欄后到達(dá)反射鏡，經(jīng)反射鏡作90o反射后垂直通過比色溶液，然后再經(jīng)濾光片送到光電管。

　　酶標(biāo)儀和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異：

　?。╨）盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，故用它作為固相載體。

　?。?）由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光來都是垂直通過待測溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。

　?。?）酶標(biāo)儀通常不僅用A，有時(shí)也使用光密度OD來表示吸光度。

　　酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分。自動(dòng)型的儀器有X，Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測試，手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測量。

　　在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)僅，此類酶標(biāo)僅一般都是自動(dòng)化型的。它設(shè)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測器，如12個(gè)通道的儀器設(shè)有12條光束或12個(gè)光，12個(gè)檢測器和12個(gè)放大器，在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下，樣品12個(gè)為一排被檢測。多通道酶標(biāo)儀的檢測速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高。